بعض الأختبارات الميكروبيولوجية للأغذية وننتظر تبادل المعلومات
النتائج 1 إلى 3 من 3

الموضوع: بعض الأختبارات الميكروبيولوجية للأغذية وننتظر تبادل المعلومات

  1. #1
    تاريخ التسجيل
    Sep 2008
    الدولة
    السعودية
    المهنة
    مهندس زراعي صناعات غذائية
    الجنس
    ذكر
    العمر
    43
    المشاركات
    6

    بعض الأختبارات الميكروبيولوجية للأغذية وننتظر تبادل المعلومات


    الكشف عن ميكروب السالمونيلاSalmonella


    يتبع الميكروب عائلة Enterobacteriaceae وبالتالي فالميكروب سالب لجرام , عصوي متحرك بالأسواط , أغلب الأنواع التابعة للجنس مرضية سواء للحيوان أو الإنسان . يسبب الميكروب بمختلف أنواعه التسمم الغذائي , إلا أن أشهر تلك الأنواع S. typhimurium , S. enteritides , S. newport .

    الخطوات التقليدية لعزل والتعرف على السالمونيلا
    أولاً : خطوات العزل والتعرف التقليدية على السالمونيلا :
    1- الإنتشال (التقوية الأولية):- Pre - enrichment .
    تختلف نوع بيئة الإنتشال المستخدمة حسب نوع المادة الغذائية ؛ حيث يستخدم مرق اللاكتوز Lactose Broth لعينات البيض , بينما يستخدم الماء المقطر المعقم المضاف إليه 0.45مل من صبغة Brilliant Green (تركيز 1٪) لعينات اللبن السائل والمجفف, أما عينات الدجاج فيستخدم لها مرق الصويا والتربتون Tryptone Soya Broth . يتم تحضين العينة مع بيئة الإنتشال على درجة 35ْم لمدة 24 ساعة .
    2- العزل :- Isolation.
    تنقسم عملية العزل إلى مرحلتين ,يتم في الأولى زرع 1مل من خطوة الإنتشال في بيئة Selenite Cystine Broth , أو Tetrathionate Brilliant Green Brothلتثبيط نمو الفلورا المصاحبة لميكروب السالونيلا Salmonella إن وجدت حيث يقوم الـ Seleniteكمادة انتخابية تثبط نمو الميكروبات عدا السالمونيلا , أما الـ L- Cystineفيشجع نمو ميكروب السالمونيلا , وهذه البيئة لا يتم تعقيمها في الأوتوكلاف حيث أن الحرارة العالية تختزل ملح الـ Seleniteويظهر هذا في صورة راسب أحمر اللون . أما في بيئة Tetrathionate Brilliant Green Broth فيتواجد كل من Sodium deoxycholate و Green Brilliantاللذان يعملان على تثبيط البكتيريا الموجبة لصبغة جرام.
    يضاف إلى هذه البيئة كل من Iodine و Potassium iodideاللذان يعملان على تكوين الـ tetrathionateمن ملح Sodium thiosulphateوهذا المركب الأول يعمل على تثبيط الميكروبات المعوية الطبيعية , يتم التحضين في هذه المرحلة لمدة 24 ساعة على درجة حرارة 35ْم .

    أما المرحلة الثانية فهي التخطيط على بيئات العزل الصلبة المتخصصة والتي تشمل مايلي :-
    أ- Bismuth Sulphite Agar (BSA)وهي تحتوي على صبغة Brilliant Greenوملح Bismuth Sulphite اللذان يثبطان الفلورا المعوية السالبة والموجبة لصبغة جرام .
    تعطي المستعمرات التابعة لـ S. typhi , S. entritides , S. typhimurium. لون أسود لامع ومحاطة بمظهر معدني لامع وذلك لإنتاج H2Sواختزال الـSulphiteإلى Ferric Sulphide .
    إلا أن هذه البيئة في بعض الأحيان تثبط بعض السلالات التابعة لجنس السالمونيلا Salmonella.
    ب- Xylose Lysine Deoxycholate Citrate Agar:- (XLD)
    كما ذكرنا سابقاً أن الـ deoxycholateيثبط البكتيريا الموجبة لجرام . يتواجد الـ L-lysineكمصدر لإنتاج H2Sفي البيئة ويضاف اللاكتوز والسكروز إلى هذه البيئة لإنتاج وسط حامضي يمنع ميكروبات القولون من تحليل الحامض الأميني L-lysineمنتجة H2S.وتؤدي إضافة الـ Thiosulphateو الـ Citrate إلى ظهور المستعمرات باللون الأسود .
    ج- Hektoen Enteric Agar:- (HEA)
    يتواجد في هذه البيئة ثلاث مصادر للكربوهيدرات ( لاكتوز – سكروز – ساليسين ) للتفرقة بين الميكروبات المرضية المعوية . وترتفع في هذه البيئة أيضاً كمية الببتون Peptone لتقليل التأثير التثبيطي لأملاح الصفراء . تظهر المستعمرات بلون أسود كما في البيئات السابقة نظراً لوجود ملحيThiosulphateو Ammonium citrateضمن مكونات البيئة .


    جدول يوضح المظاهر المورفولوجية للعزلات التابعة لجنس السالمونيلا Salmonella


    على بيئات العزل المختلفة


    البيئة



    المظهر المورفولوجي للمستعمرات

    BSA

    تظهر مستعمرات السالمونيلا بلون أسود لامع (بعضها لا يعطي) . اللون حول المستعمرات يتغير من اللون البني للأسود بزيادة التحضين ليعطي ما يعرف بـ halo-effect .
    XLD

    مستعمرات السالمونيلا لها لون وردي مع وجود مركز أسود والسلالات الموجبة للاكتوز والسكروز تظهر بلون أصفر مع وجود مركز أسود ( بعضها لا يعطي )
    HEA

    تظهر المستعمرات بلون أزرق إلى أخضر مزرق مع وجود مركز أسود , السلالات الموجبة لتخمر اللاكتوز والسكروز ومجموعة الكوليفورم تعطي مستعمرات لها لون السالمونيلا .
    الإختبارات التأكيدية لميكروب السالمونيلا :-
    1- التفاعل في بيئتي Triple sugar iron agarو Lysin iron agar:-
    يتم التلقيح على أسطح الأجار المائل في كلتا البيئتين وبعد التحضين تظهر المستعمرات التابعة لجنس السالمونيلاباللون الأحمر على السطح (تفاعل قاعدي) وبلون أصفر تحت الأجار (تفاعل حامضي) مع وجود لون أسود عند إنتاج H2S.
    2- الفحص السيرولوجي (المناعي) :-
    تؤخذ العزلات للتعرف عليها بالإختبارات السيرولوجية حيث يتم فحص 6 مستعمرات / 25جم عينة .


    عزل وعد ميكروب Vibrio parahaemalyticus


    يعتبر جنس الـ Vibrioسالب لجرام , متغير في الشكل (منحني أو مستقيم), عصويات قصيرة , متحرك عادةً بواسطة أسواط طرفية , موجب للكتاليز , لاهوائي اختياراً ومحب للملح .
    تنمو الـ Vibrio parahaemalyticus بحيوية كاملة في وجود 3٪من تركيز الملح , الميكروب يتأثر بانخفاض الحرارة , وأيضاً يزداد معدل الموت مع التجميد .
    _ خطوات العزل والتعرف على ميكروب Vibrio parahaemalyticus.
    1) الإنتشال : يعتمد عزل الميكروب على قدرته علىالنمو في الظروف القاعدية . ففي مرق الببتون القاعدي Alkaline peptone waterكمرحلة انتخابية أولى (pH 8.6 – 9)لابد أن لا يزيد زمن التحضين على 8 ساعات حتى لا تساعد على نمو الفلورا الأخرى المصاحبة للـ Vibrio. ويمكن استخدام بيئة أكثر تخصصاً مثل Salt Polymyxin Broth .
    2) العزل: تعتبر بيئة Thiosulfate Citrate Bile salt Sucrose agar (TCBS)منأكثر البيئات الصلبة تخصصاً استخداماً لعزل الـ Vibrio.
    وهذه البيئة بالأساس أُعدت لعزل Vibrio parahaemalyticusولكن الأنواع الأخرى التابعة لجنس Vibrioيمكنها النمو عليها ؛ إلا أن الأنواع V. hollisae, V.parahaemalyticus, V. vulnificusيمكن تمييزها عن V. choleraeبعدم قدرتها على تخمير السكروز وإعطاء مستعمرات لها لون أخضر , أما V. choleraeفتنتج مستعمرات لها لون أصفر .


    عزل وعد ميكروب Staphylococcus aureus



    هذا الميكروب موجب لجرام , خلاياه لها شكل كروي بيضاوي , وظراً لأن انقسام الخلايا يحدث في أكثر من مستوى فإنها تتجمع لتعطي الشكل العنقودي (عنقود العنب) .
    الميكروب لاهوائي اختيارياً وموجب الكتاليز , يتحمل تركيز من الملح يصل حتى 15٪. يفرز الميكروب العديد من السموم الخارجية منA حتى E .

    خطوات العزل والتعرف على بكتيريا المكورات العنقودية :-

    من أكثر البيئات نجاحاً في عزل هذا الميكروب هي بيئة Baird-Parkerوهي تحتوي على مجموعة كبيرة من المواد الانتخابية لها كفاءة عالية على انتخاب الميكروب , وكذلك إعطاء الحيوية الكاملة للخلايا المجهدة .
    فكل من Lithium chloride و Tellurite يعملان كمواد انتخابية , بينما صفار البيض و Pyruvateفيعملان على استعادة الخلايا المجهدة .
    اختزال الـ Telluriteبواسطة S. aureusيعطي المستعمرات لون أسود لامع وتحاط بها هالة أو دائرة شفافة نظراً لتحلل مح البيض مع ظهور حافة داخلية لها لون أبيض راجع لترسيب الأحماض الدهنية.
    يتم تدعيم وتأكيد نتائج العزل بواسطة الكشف عن انتاج انزيم الـ Coagulaseالذي يعمل على تجلط بلازما الأرانب . وكذلك إنتاج أنزيم Thermostable nucleaseالذي يحلل الـ DNA.


    عزل وعد ميكروب Clostridium perfringens

    هذا الميكروب موجب لصبغة جرام , عصوي الشكل , لاهوائي , متجرثم وتأخذ الجراثيم الداخلية الشكل البيضاوي . ويختلف هذا النوع عن بقية جنس Clostridium في كونه غير متحرك , تظهر عصوياته كبيرة الحجم نسبياً مع تكون كبسولة خارجية .

    بالرغم من أنه غير هوائي إلا أنه يمكن أن يقاوم وجود الأوكسجين . يفرز هذا النوع أنواع مختلفة من السموم ولذلك قسم تبعاً لذلك من Aحتى E، ويعتبر النوع Clostridium perfringens Aهو المسبب الرئيسي للتسمم الغذائي .

    خطوات العزل والتعرف على ميكروب Clostridium perfringens.

    عادة ما يتم العد المباشر للخلايا الخضرية والمتجرثمة باستخدام البيئات المتخصصة , ولكن في العينات عالية التلوث يتم تقدير جراثيم الميكروب وذلك بعد التسخين لدرجات حرارة تصل إلى 80ْم لمدة 10 دقائق ؛ وهي حرارة وفترة كافية لتكون الجراثيم .
    أكثر البيئات استخداماً تستخدم مواد انتخابية مثل الـ Sulfiteالذي يختزل ليعطي لون أسود للمستعمرات التابعة لجنس Clostridium. وتعتبر بيئة Tryptone Sulfite Cycloserine (TSC) من أكثر البيئات استخداماً لهذا الغرض ؛ هذا ويفضل طريقة الصب بالأطباق عن طريقة الفرد على سطح الأطباق , حيث أنه في أغلب الأحيان في الحالة الثانية تظهر المستعمرات باللون الأبيض .

    وأرجو مبادلة المعلومات على البريد الإلكتروني Darshco1980[at]yaoo.com


    مواضيع مشابهة:

  2.    روابط المنتدى



  3. #2
    تاريخ التسجيل
    Jun 2008
    الدولة
    السعودية
    المهنة
    مهندس
    الجنس
    ذكر
    العمر
    39
    المشاركات
    56

    تعليق بسيط


    هل لاحظتم ان الاختبات الي الي تجري عهلي الميكروبات الممرضه .
    كثيره وممرحله 3 اختارات غالبا وهي :
    1- افتراضي - احتمالي
    2- تاكيدي
    3- تكميلي .
    كماهو في الاختبار علي الرابط

    http://f.zira3a.net/showthread.php?t=8926



    لماذا لان الممرضه بالذات يجب ان تكون ففي المواصفه microbal lemit الحدودود الميكروربيه
    صفر zero
    لذالك من راي الشخصي عدم اجراء total count لها . لانها في المواصفه صفر .
    اما الفلورا micro flora . فالاختبار واحد وهو total count لان لها جدود ميكروبيه .
    ذياده الفلورا قد تغير التركيبه الفزيائيعه والكيميائيه فقط.

    ولا ايش الرأي .


  4. #3
    الصورة الرمزية amonaa
     غير متصل  مشرفة قسم الصناعات الغذائية
    تاريخ التسجيل
    Feb 2007
    الدولة
    البحيرة - اسكندرية -مصر
    المهنة
    مهندسة زراعية -ماجستير صناعات غذائية
    الجنس
    أنثى
    المشاركات
    2,080

    اولا اشكرك اخى للموضوع المهم جدا وهو الكشف عن الميكروبات الممرضة والتى تهتم جداااااااااااا بالكشف عن الميكروبات المسببة لفساد الغذاء والتسبب فى الامراض واشكر اخى محمد عجيب للرد والتدوين لمعلومة هامة جدا وهى انه لابد ان تكون النتيجة النهائية صفر لمحتوى الميكروبات الممرضة .......................بارك الله فيكم