طرق دراسة أمراض النبات - القسم الاول
السلام عليكم ورحمة الله
نعود الى هذا الموقع الكريم "زراعة نت" بموضوع جديد بعد فترة انقطاع ، والموضوع يهم طلبة كلية الزراعة /قسم وقاية النبات ، وبقية الطلبة والمهتمين علاوة على المزارعين الكرام
للتعرف على الحالة المرضية للنبات يجب إجراء بعض الدراسات في مكان ظهور الإصابة وهذه الدراسات تنقسم الى نوعين :
أ - دراسة المرض في الحقل :
وعند إجراء دراسة أو تشخيص المرض حقليا ، لابد من الاهتمام بمعرفة النقاط الآتية:
1- معرفة وتسجيل أعراض الإصابة في الحقل سواء كانت على المجموع الخضري أو الجذري أو كلاهما ومقارنتها بالنباتات السليمة.
2- معرفة تاريخ ظهور الإصابة.
3- مدى انتشار المرض في الحقل.
4- تحديد نوع التربة والمحاصيل السابقة.
5- هل سبق ظهور المرض في نفس المكان من الحقل.
6- هل تقتصر الإصابة على صنف واحد دون آخر أم انه عام الانتشار.
7- معرفة شدة الإصابة Severity ومقدار الخسائر الناجمة عنها.
8- معرفة المعاملات الزراعية والكيميائية.
قد يساعد وجود الأعراض والظروف البيئية المختلفة في الحقل والتي تحيط النبات ، على التعرف على المرض ، غير أن ذلك لا يعتبر كافيا لتحديد المرض بسبب أن كثيرا من الأمراض ذات أعراض متشابهة ، وهذا يجعل الدراسة المختبرية ضرورة حتمية.
ب – دراسة المرض في المختبر:
لدراسة وتشخيص الحالة المرضية لنبات معين ، في حالة تعذر تشخيص المرض حقليا ، يراعى اخذ نماذج مرضية من الحقل وجلبها الى المختبر ، مع الأخذ بالاعتبار النقاط الآتية عند ذلك :
1- يفضل اخذ نباتات كاملة أو أجزاء نباتية تظهر عليها الأعراض المرضية، وتؤخذ في نفس الوقت نباتات سليمة من اجل المقارنة.
2- يفضل اخذ النموذج النباتي الكامل مع جزء من التربة ويوضع في كيس من البلاستك حتى لا يتعرض للجفاف أثناء النقل.
3- يفضل إجراء الفحص المختبري للعينة او النموذج النباتي المصاب حال وصوله الى المختبر، أو أن يحفظ في الثلاجة لحين الفحص.
العزل والتشخيص ISOLATION & DIAGNOSIS
اولا- العزل ISOLATION
وهو خطوة تسبق عملية التشخيص، يتم فيها أخذ عينات من المسبب المرضي، بطريقة تتلاءم مع خصائص كل مسبب مرضي ومع طرق الإصابة ومع الأجزاء النباتية التي ينمو عليها.
وتختلف طرق العزل باختلاف نوع المسبب المرضي وكما يأتي:
الفطريات FUNGIتعريف الفطريات :
هي كائنات حية نباتية عديمة الكلوروفيل تحصل على غذائها عن طريق الترمم والتطفل ، لها جسم بسيط التركيب يعرف بالثالوس Thallus ويختلف من حيث درجة التطور حسب نوع الفطر ، ففي الأنواع الواطئة ، يتألف الثالوس من كتلة بروتوبلازمية خالية من الجدار الخلوي ، تشبه الاميبيا ، كما في الفطريات الهلامية Slime moulds ، وقد تكون من خلية واحدة بسيطة بأسواط متحركة ، كما في الفطريات الكتريدية ، أو من خلية واحدة ، كما في الخمائر والتي تتكاثر بالتبرعم والانشطار الخلوي ، أما في الأنواع المتطورة فيتألف جسم الفطر (الثالوس) من مجموعة خيوط رفيعة أنبوبية الشكل ، متفرعة ومتشابكة تدعى بالغزل الفطري أو (الماسيليوم) Mycelium ، ويسمى الخيط المفرد بالهايفة Hypha . يكون الخيط الفطري ممتلئا بالسايتوبلازم ، ويمكن أن يكون منقسماSeptat بواسطة جدران مستعرضة الى سلسلة من الخلايا كما في الفطريات الكيسية والبازيدية والناقصة ، أو غير منقسم فيكون الخيط الفطري مدمجا خلويا Coenocytic أي مؤلفا من خلية واحدة عديدة النواة كما في الفطريات البيضية Oomycetes والفطريات الزايكونية Zygomycetes .
عزل الفطريات Isolation of Fungi
1. العزل من الأجزاء النباتية : وهو عزل المسبب المرضي من الأجزاء النباتية المصابة (الاوراق ،السيقان،الثمار،الجذور، الدرنات) وتتم بأخذ أجزاء صغيرة منها وتعقيمها سطحيا بمادة الكلوراكس (القاصر) 10% ، لمدة 1-2 دقيقة ثم تغسل بماء مقطر معقم وتنشف بورق نشاف لازالة آثار الكلوراكس ثم تزرع في أطباق بتري تحوي على الوسط الغذائي PDA بعدها توضع في الحاضنة بدرجة حرارة 25 مO لمدة 5 أيام لغرض نمو الفطريات.
2. العزل من التربة Isolation from Soil :وتتم بطريقتين :-
أ- العزل المباشر : تؤخذ أجزاء صغيرة من التربة الزراعية عشوائيا وتوزع على أطباق بتري تحوي على الوسط الغذائي PDA ثم توضع في الحاضنة تحت درجة حرارة 25 مO لمدة 5 أيام .
ب- العزل بطريقة التخافيف (الاطباق المصبوبة) ويتم كالآتي:
- تنخل (تغربل) كمية من تربة الحقل بمنخل دقيق للتخلص من الشوائب العالقة بها.
- تؤخذ عينة بوزن 25 غرام من التربة اعلاه وتوضع في وعاء بسعة لتر ثم يضاف اليها 225 مل من الماء المعقم ، وتخلط التربة بالماء جيدا ، وبذلك نكون قد اجرينا تخفيفا بنسبة 1/10 .
- ينقل 1 مليلتر من المعلق بواسطة ماصة الى انبوبة تحوي على 9 مليلتر من الماء المعقم لنحصل على محلول مخفف بنسبة 1/100 .
- يؤخذ 1 مليلتر من المعلق الاخير ويضاف الى 9 مليلتر من الماء المعقم للحصول على محلول مخفف بنسبة 1/1000 ، وباستمرار هذا العمل نستطيع الحصول على تخفيف بنسبة 1/10000 .......الخ
- ينقل مل من المحلول المعلق بتركيز 1/100 الى طبق زجاجي يحوي على بيئة اكار الدكستروز والبطاطا PDA ثم يحرك الطبق حركة دائرية حتى يوزع المعلق على سطح البيئة ويكرر نفس العمل بالنسبة للتخافيف الأخرى.
- توضع الأطباق في الحاضنة على درجة حرارة 25 مO ولمدة 5 ايام يمكن بعدها ملاحظة نمو المستعمرات للتعرف على الفطريات النامية.
ج – العزل بطريقة المصائد النباتية : تؤخذ كمية من التربة المذكورة في (ب) وتخفف بالماء كما ذكر في أعلاه ، بعد وضعها في دورق زجاجي سعة 1 لتر ، ثم توضع مقاطع من أوراق نباتية سليمة في الدورق بعد تعقيمها سطحيا بالكلوراكس لمدة 1-2 دقيقة، بعدها يوضع الدورق في رجاج كهربائي لفترة 2-3 ساعة أو اكثر حسب الحالة المرضية ، فتعمل مقاطع الأوراق النباتية باصطياد الفطريات ، ثم يفرغ محتوى الدورق بمنخل لغرض اخذ مقاطع الأوراق النباتية فقط والتي تنشف بورق نشاف ، بعدها تزرع في أطباق بتري تحتوي على وسط زرعي ثم توضع في الحاضنة لغرض نمو الفطريات.
3. العزل من الهواء Isolation from Air :تعرض أطباق بتري تحوي على وسط غذائي ، للهواء مباشرة لمدة دقيقتين ثم توضع في الحاضنة بدرجة 25 مO ، وتفحص هذه الأطباق بعد مرور 5 – 7 أيام ثم تشخص الفطريات.
البكتيريا Bacteriaهي كائنات حية وحيدة الخلية ،مجهرية لا ترى بالعين المجردة ، لا تحتوي على نواة حقيقية ولا على غلاف نووي وانما تحتوي على مادة نووية هي عبارة عن شريط من حامض نووي DNA .يتراوح طولها بين 0.5 – 5 ميكرون وقطرها من 0.5 – 1 ميكرون . وهناك أشكال مختلفة من البكتيريا فقد تكون كروية Coccus او عصوية Bacillus او حلزونية Spirillum . وتتكاثر البكتيريا بالانشطار الخلوي وقد تكون غير متحركة او متحركة بواسطة اسواط .
طرق عزل وتشخيص البكتيريا:
وتتم كما يأتي:
1. العزل من الاجزاء النباتية : ونعني بها عزل البكتيريا من الاجزاء النباتية المصابة بطريقة التخافيف:
أ- حيث تؤخذ اجزاء صغيرة من نباتات مصابة ، وتعقم سطحيا بواسطة القاصر (الكلوراكس) لمدة 1-2 دقيقة ثم تغسل بماء مقطر معقم
ب- توضع الاجزاء اعلاه في انبوبة اختبار تحتوي على 10 مليلتر من الماء المقطر المعقم وتترك لمدة كافية من اجل خروج البكتيريا الى الماء
ت- يؤخذ 1 مليلتر من المحلول البكتيري بواسطة ماصة معقمة ليضاف على 9 مليلتر من الماء المقطر والمعقم في انبوبة اختبار ، وتتكرر هذه العملية لغرض تحضير عدة تراكيز من المحلول البكتيري المخفف .
ث- تصب هذه التراكيز في اطباق بتري حاوية على الوسط الزرعي الأكار المغذي Nutrient Agar وتوضع في الحاضنة (بصورة مقلوبة لكي لا تسقط قطرات البخار المتكثفة على غطاء الطبق على الوسط الزرعي وبالتالي انتشار وتخفيف المستعمرات البكتيرية ) على درجة 30-35 درجة مئوية لمدة 1-3ايام .
ج- بعد نمو المستعمرات البكتيرية في الاطباق يتم فحصها وتشخيصها .
2. العزل من التربة :
أ- العزل المباشر: وهي نفس طريقة عزل الفطريات من التربة التي سبق شرحها حيث تؤخذ كمية صغيرة من التربة الزراعية من حقل ،عشوائيا ، بواسطة مشرط لتوزع على عدد من الاطباق الحاوية على الوسط الزرعي الاكار المغذي NA ثم توضع الاطباق في الحاضنة على درجة حرارة 30-35 درجة مئوية لمدة 1-3 ايام ، ثم تفحص بعد ذلك لغرض تشخيص انواع البكتيريا النامية.
3. العزل من الهواء: وهي نفس طريقة عزل الفطريات من الهواء التي سبق شرحها.
طرق تنقية المزارع البكتيرية
1- استخدام أوساط زرعية صلبة وذلك بأخذ جزء صغير من مزرعة بكتيرية نامية على وسط زرعي صلب وهو الاكار المغذي NA بواسطة اللوب Loop وتتم التنقية بالطرق الآتية :-
أ – طريقة التخطيط Streak وتتم هذه الطريقة اما باستخدام أطباق أو أنابيب اختبار تحوي على وسط زرعي صلب .
ب- طريقة الطعن Stable وتتم هذه الطريقة باستخدام اللوب Loop على أنابيب اختبار تحوي على وسط زرعي صلب حيث يستخدم اللوب بزرع العينة البكتيرية بهذه الطريقة .
ت- طريقة الزكزاك Zigzag وتتم هذه الطريقة باستخدام اللوب Loop على أطباق بتري تحوي على وسط زرعي صلب وتزرع فيها العينة البكتيرية بشكل زكزاك بواسطة اللوب.
2- استخدام أوساط زرعية سائلة (Broth ) وهو عبارة عن وسط زرعي بدون إضافة الاكار، يوضع في أنابيب اختبار ويلقح بمزرعة بكتيرية نقية ، ثم تترك الأنابيب في الحاضنة ، وبعد1-3 أيام يمكن ملاحظة النمو البكتيري والذي يظهر بشكل :
أ- عكرة الوسط الزرعي (سائل عكر)
ب- راسب
ت- غشاء على سطح الوسط الزرعي
ث- مادة لزجة (لزوجة الوسط الزرعي)
الفيروسات VIRUSES
وهي عبارة عن أجسام أو تراكيب دقيقة جدا لا يزيد قطرها عن 0.2 ميكرون ، لا يمكن أن ترى إلا بواسطة المجهر الإلكتروني . لها القابلية على إحداث المرض والمرور من خلال المرشحات البكتيرية ، لذلك سميت أيضا بالرواشح ، جميع أنواعها إجبارية التطفل .
يتركب جسم الفايروس من نوع واحد من الأحماض الأمينية ، أما DNA أو RNA اعتمادا على نوعية الخلايا التي تعيش عليها . جسم الفيروس يسمى فايرون Viroin ويتألف من الحامض النووي محاطا بغلاف خارجي من البروتين يسمى كابسد Capsid . و لا يتكاثر الفايروس إلا داخل الخلايا الحية ، لذلك لابد من تنميته في خلايا حية (الزرع النسيجي Tissue Culture) أو استخدام أجنة البيض إضافة الى الحيوانات المختبرية.
لا تنقسم الفايروسات وليس لها أعضاء تكاثرية غير أنها تتكاثر بالتضاعف وذلك بتحويل مكونات الخلية الفايروسية الى عدد اكبر من جسيمات الفايروس بعد السيطرة على النظام الوراثي لخلية العائل الحي ، ولا تحدث المرض عن طريق استهلاك الخلية الحية او قتلها ولكن عن طريق ما تحدثه من اضطراب في الفعاليات الحيوية للخلية الحية المصابة .
عزل الفيروسات Isolation of Viruses
تعتبر عملية عزل الفيروسات في المختبر من العمليات الصعبة جدا ، وذلك لصغر حجمها وعدم إمكانية رؤيتها إلا بواسطة المجهر الإلكتروني ، كما أنها تعتبر من الكائنات إجبارية التطفل والتي لا يمكن إنماءها على وسط غذائي صناعي ، وهذا الأمر ينطبق على بعض المسببات المرضية التي تعيش معيشة إجبارية ، مثل الفايرويدات والمايكوبلازما والركتسيا . وتحتاج عملية العزل الى تقنية عالية وأجهزة طرد مركزي بسرعات عالية جدا Ultracenterifuge، وهي ما يصعب توفرها في المختبرات الاعتيادية. لذا يستدل على وجود الفيروسات على النباتات عن طريق الأعراض المرضية التي تظهر على النباتات المصابة ، وللكشف عنها نقوم بنقلها الى نباتات سليمة ، فان ظهرت نفس الأعراض المرضية على النباتات السليمة ،تأكدنا أن المسبب المرضي هو مسبب فايروسي.
يتبع القسم الثاني
مواضيع مشابهة:
اقتباس
السلام عليكم ورحمة الله وبركاته , والصلاة والسلام على رسول الله صلى الله عليه وسلم 
