المشاركة الأصلية كتبت بواسطة lcd
أخي الكريم لقد اطلعت على المصدر الذي ذكرته فلم أجد شيئا له علاقة بعزل الد ن ا من الحليب والطريقة مغايرة للطريقة التي ذكرتها أنت.
أولا اخي الكريم كما ذكرت فانك وضعت النتائج والمناقشة وهذا يدل انك انتهيت من البحث .
ثانيا : للاستخلاص فانك ذكرت EDTA بفر وهنا لا يستخدم لوحده انما يستخدم مع Tris بفر ويسميان مع بعض TE بفر .مهمته الحفاظ على حيوية الد ن ا , وتثبيط عمل انزيم dnase الذي يحلل الد ن ا .
وثم وبعد اضافة أنزيم بروتياز k والتحضين تأتي مرحلة الغلي , لم تذكرها . اضافة الى مراحل اخرى وخطوات ايضا لم تذكر وهي ان بدت بسيطة ولكنها في استخلاص الد ن ا تكون ضرورية واغفال اي خطوة مهما بدت بسيطة تمنعك من الوصول لل د ن ا او تثبط عملية تضخيم الد ن ا بالبي سي آر .
ثالثا : استخدام البريمر (البادئات) فهناك خياران اما انك اخذتها من بحث سابق اثبتوا انها بريمر انتقائي لهذا النوع البكتيري وهنا عليك ذكر المرجع , أو أنك أنت من صممت هذه البرايمرات لتكون انتقائية وخاصة بهذا النوع وهنا يجب ان تذكر كيف تم التصميم وبأي برنامج ومبدأ العمل , وكيف أثبت أنها انتقائية.
وهناك نقاط استفهام اخرى بعد ان توضح لنا ما سبق .
ولك جزيل الشكر والنقاش فيه الفائدة للجميع ان شاء الله
أشكرك أخي على النقاش المفيد و أود أن أنوه :
1- البحث قدتم و نشر في كلية الهندسة الغذائية و التقانة الحيوية - جامعة واشنطن لكنه يجرى في سورية كبحث علمي و ليس كرسالة ماجستير او دكتوراه و لم ينته بعد
2- فيما يخص إستخدام TE نعم أعتذر عن الخطأ الغير مقصود حيث يستخدم TE كبفر أيضا هناك مرحلة الغلي بعد مرحلة التحضين لمدة 15 دقيقة
3- فيما يخص استخدام البريمرات تم إستخدامها كبريمرات إنتقائية من دراسة سابقة :
Wang, Q., F. B. Vasey, J. P. Mahfood, J. Valeriano, K. S. Kanik,
B. E. Anderson, and P. H. Bridgeford. 1999. V2 regions of 16S
ribosomal RNA used as amolecular marker for the specific identification
of streptococci in peripheral blood and synovial fluid from
patients with psoriatic arthritis. Arthritis Rheum. 42:2055–2059
أرجو أن أكون وضحت و شكرا أخي الكريم على النقاش و حبذا لو أشرت إلى نقاط الأستفهام الاخرى لتعم الفائدة